霉菌毒素吸附劑體外吸附效率的比較研究

2020-05-20 15:47:27 點擊：

霉菌毒素是霉菌的次級代謝產物，普遍存在于飼料及其原料中。據報道，全世界至少25%的谷物不同程度地受到霉菌毒素的污染，對飼料業(yè)、畜牧業(yè)和人類健康造成嚴重危害[1]。目前已知污染飼料的霉菌毒素約有100多種，主要來自青霉菌屬、曲霉菌屬和鐮刀菌屬所，其中對動物危害最嚴重的霉菌毒素有：黃曲霉毒素 (Aflatoxin, AF)、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）、嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、煙曲霉毒素（Fumonisin，FUM）等。

控制飼料或食品中霉菌毒素的方法有很多，其中最常用的、最有效的方式是借助霉菌毒素吸附劑]吸附飼料中的霉菌毒素，并與之緊密結合，使霉菌毒素在通過動物消化道時不被動物所吸收，而直接排出體外，從而避免了霉菌毒素對動物的危害。為了比較不同霉菌毒素吸附劑對霉菌毒素的吸附效果，本實驗在模擬體內胃腸道環(huán)境下，采用兩階段法系統評估了市場上常見的霉菌毒素吸附劑對黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附情況，為更好的解決飼料中霉菌毒素的污染提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 霉菌毒素吸附劑

從國內市場上收集國內及國外企業(yè)生產的9種霉菌毒素吸附劑，分別標記為樣品A、B、C、D、E、F、G、H、I，Toxfin® S樣品由建明工業(yè)（珠海）有限公司提供。

1.2 霉菌毒素標準液的制備

1.2.1 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液的配制（pH 3.0 和pH 6.8）

精密稱取35.814 g 十二水合磷酸氫二鈉至900 mL的蒸餾水中，然后用磷酸調節(jié)pH值至3.0和6.8，定容后備用。

1.2.2 標準霉菌毒素工作液（pH 3.0）

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素標準品，分別購自新加坡Pribo 實驗室。用pH 3.0磷酸鹽緩沖液配制霉菌毒素工作液。工作液中霉菌毒素的含量是根據飼料中霉菌毒素國家限量標準及生產實際情況而設定。

THZ-82 型恒溫水浴振蕩器；Bio-Rad iMarkTM 酶標儀；SK-1 快速混勻器； Kubota 2420 型高速離心機；黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素酶聯免疫定量試劑盒（荷蘭，EURO-PROXIMA公司）。

1.4方法

1.4.1 吸附實驗

稱取50 mg霉菌毒素吸附劑樣品于試管中，加入10 mL pH3.0霉菌毒素工作液，體系中霉菌毒素吸附劑的添加量為5 mg/ml。空白對照為不添加任何霉菌毒素吸附劑的10 mL pH3.0霉菌毒素工作液。將試管放在37℃恒溫振蕩器上，震蕩1 h。反應結束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測定上清液中的霉菌毒素含量。

1.4.2 解吸附實驗

上述實驗結束后，傾去離心管中上清液，在剩余物中加入10 mL pH6.8磷酸鹽緩沖液，37℃恒溫震蕩1 h。反應結束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測定上清液中剩余的霉菌毒素含量。

1.4.3 數理處理

根據檢測毒素的含量，按下列公式計算霉菌毒素吸附劑的吸附效率。

Y=100×（A-B-C）/A

上式中：Y 表示霉菌毒素吸附劑對霉菌毒素的吸附效率；A表示空白對照組（即霉菌毒素工作液中不加吸附劑）含量；B表示吸附試驗中上清液中霉菌毒素的含量；C表示解吸附試驗中上清液中霉菌毒素的含量。

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霉菌毒素吸附劑體外吸附效率的比較研究

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