霉菌毒素吸附劑體外吸附效率的比較研究

2020-05-20 15:47:27 點擊：

霉菌毒素是霉菌的次級代謝產(chǎn)物，普遍存在于飼料及其原料中。據(jù)報道，全世界至少25%的谷物不同程度地受到霉菌毒素的污染，對飼料業(yè)、畜牧業(yè)和人類健康造成嚴重危害[1]。目前已知污染飼料的霉菌毒素約有100多種，主要來自青霉菌屬、曲霉菌屬和鐮刀菌屬所，其中對動物危害最嚴重的霉菌毒素有：黃曲霉毒素 (Aflatoxin, AF)、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）、嘔吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、煙曲霉毒素（Fumonisin，F(xiàn)UM）等。

控制飼料或食品中霉菌毒素的方法有很多，其中最常用的、最有效的方式是借助霉菌毒素吸附劑]吸附飼料中的霉菌毒素，并與之緊密結(jié)合，使霉菌毒素在通過動物消化道時不被動物所吸收，而直接排出體外，從而避免了霉菌毒素對動物的危害。為了比較不同霉菌毒素吸附劑對霉菌毒素的吸附效果，本實驗在模擬體內(nèi)胃腸道環(huán)境下，采用兩階段法系統(tǒng)評估了市場上常見的霉菌毒素吸附劑對黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的吸附情況，為更好的解決飼料中霉菌毒素的污染提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 霉菌毒素吸附劑

從國內(nèi)市場上收集國內(nèi)及國外企業(yè)生產(chǎn)的9種霉菌毒素吸附劑，分別標記為樣品A、B、C、D、E、F、G、H、I，Toxfin® S樣品由建明工業(yè)（珠海）有限公司提供。

1.2 霉菌毒素標準液的制備

1.2.1 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液的配制（pH 3.0 和pH 6.8）

精密稱取35.814 g 十二水合磷酸氫二鈉至900 mL的蒸餾水中，然后用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0和6.8，定容后備用。

1.2.2 標準霉菌毒素工作液（pH 3.0）

黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素標準品，分別購自新加坡Pribo 實驗室。用pH 3.0磷酸鹽緩沖液配制霉菌毒素工作液。工作液中霉菌毒素的含量是根據(jù)飼料中霉菌毒素國家限量標準及生產(chǎn)實際情況而設定。

THZ-82 型恒溫水浴振蕩器；Bio-Rad iMarkTM 酶標儀；SK-1 快速混勻器； Kubota 2420 型高速離心機；黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素酶聯(lián)免疫定量試劑盒（荷蘭，EURO-PROXIMA公司）。

1.4方法

1.4.1 吸附實驗

稱取50 mg霉菌毒素吸附劑樣品于試管中，加入10 mL pH3.0霉菌毒素工作液，體系中霉菌毒素吸附劑的添加量為5 mg/ml。空白對照為不添加任何霉菌毒素吸附劑的10 mL pH3.0霉菌毒素工作液。將試管放在37℃恒溫振蕩器上，震蕩1 h。反應結(jié)束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測定上清液中的霉菌毒素含量。

1.4.2 解吸附實驗

上述實驗結(jié)束后，傾去離心管中上清液，在剩余物中加入10 mL pH6.8磷酸鹽緩沖液，37℃恒溫震蕩1 h。反應結(jié)束后于3 500 r/m離心10 min，ELISA法測定上清液中剩余的霉菌毒素含量。

1.4.3 數(shù)理處理

根據(jù)檢測毒素的含量，按下列公式計算霉菌毒素吸附劑的吸附效率。

Y=100×（A-B-C）/A

上式中：Y 表示霉菌毒素吸附劑對霉菌毒素的吸附效率；A表示空白對照組（即霉菌毒素工作液中不加吸附劑）含量；B表示吸附試驗中上清液中霉菌毒素的含量；C表示解吸附試驗中上清液中霉菌毒素的含量。

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