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1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 復(fù)合益生菌

由乳酸菌和釀酒酵母等組成，其活菌總數(shù)≥1.0×10⁹ cfu/g，乳酸菌和釀酒酵母均由山東某公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)原料

國(guó)產(chǎn)去皮豆粕（市場(chǎng)采購(gòu)）：黃色、無(wú)霉變、無(wú)結(jié)塊和異味，粉碎后過(guò)篩；玉米粉、麩皮粉，市場(chǎng)采購(gòu)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)酵豆粕的制備

按38∶1∶1 準(zhǔn)確稱取粉碎豆粕、玉米粉和麩皮粉，充分混合均勻，料水比為5∶4，接種量2.0‰，以不接種任何菌株的空白料為對(duì)照，32 ℃恒溫密封發(fā)酵72 h 后，65 ℃烘干粉碎得到發(fā)酵豆粕樣品，備用。

1.2.2 發(fā)酵豆粕感官性狀評(píng)價(jià)

在光線正常且無(wú)異味的環(huán)境中，稱取發(fā)酵豆粕樣品于平皿中，通過(guò)眼觀、鼻聞及手捻等方法對(duì)發(fā)酵豆粕顏色、氣味和手感特征等進(jìn)行評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：NY/T 2218-2012 飼料原料發(fā)酵豆粕中對(duì)發(fā)酵豆粕感官性狀的要求。

1.2.3 pH 測(cè)定

取10 g 樣品加入90 mL 滅菌后的生理鹽水中， 攪拌均勻后直接采用玻璃電極pHS-3C 型pH 計(jì)測(cè)定。

1.2.4 發(fā)酵豆粕中微生物含量的檢測(cè)

分別按中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：GB 4789.35-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌和GB 4789.15-2010 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)酵母菌計(jì)數(shù)測(cè)定發(fā)酵豆粕中乳酸菌和酵母菌的含量。

1.2.5 發(fā)酵豆粕中水分、粗蛋白質(zhì)、酸溶蛋白和總酸含量的檢測(cè)

水分按國(guó)標(biāo)（GB/T 6435-2014）測(cè)定；粗蛋白質(zhì)按國(guó)標(biāo)（GB/T 6432-1994）凱氏定氮法測(cè)定，以干物質(zhì)為基礎(chǔ)計(jì)算測(cè)定結(jié)果；酸溶蛋白含量采用三氯乙酸（TCA）法測(cè)定；總酸（以乳酸計(jì)）含量的測(cè)定方法，參照GB/T 12456-2008 進(jìn)行。

1.2.6 發(fā)酵豆粕中粗纖維和灰分含量的檢測(cè)

發(fā)酵豆粕中粗纖維的含量參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 6434-2006 飼料中粗纖維測(cè)定方法， 粗灰分的含量參考中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 6438-2007 飼料中粗灰分測(cè)定方法。以干物質(zhì)為基礎(chǔ)計(jì)算測(cè)定結(jié)果。

1.2.7 發(fā)酵豆粕中大腸桿菌、霉菌和揮發(fā)性鹽基氮含量的檢測(cè)

大腸桿菌按國(guó)標(biāo)（GB/T 18869-2002） 飼料中大腸菌群的測(cè)定， 霉菌數(shù)量按GB 4789.15- 2010 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定，揮發(fā)性鹽基氮測(cè)定方法參照GB 5009.44-2003 進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 軟件進(jìn)行初步處理后，采用SPSS 13.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用One-way ANOVA 進(jìn)行方差分析，LSD 法進(jìn)行組間多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P <0.05 表示差異顯著。

2.1 復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵對(duì)發(fā)酵豆粕感官性狀的影響

復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵72 h 后取樣觀察，外觀呈淺黃色至淺棕色，色澤均勻一致，無(wú)結(jié)塊，無(wú)異物，無(wú)異臭味，且有淡的酵香味，符合優(yōu)質(zhì)發(fā)酵豆粕標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵豆粕對(duì)pH 和有益微生物的影響

復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵豆粕對(duì)pH 和有益微生物的影響結(jié)果見表1，由表1 可知，復(fù)合益生菌組的pH 低于對(duì)照組1.98 個(gè)單位， 差異顯著（P < 0.05）；復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕顯著提高了乳酸菌和酵母菌數(shù)量， 其中乳酸菌活菌數(shù)在10⁹ 水平，酵母菌活菌數(shù)在10⁸ 水平，發(fā)酵前后乳酸菌、酵母菌活菌數(shù)提高3 ～ 4 個(gè)數(shù)量級(jí)。

3.1 復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵豆粕對(duì)pH 和有益微生物的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕，能夠促進(jìn)豆粕中有益微生物的生長(zhǎng)繁殖， 降低pH，這與前人的研究結(jié)果是一致的（付亭亭，2014）；在發(fā)酵前期，酵母菌作為兼性厭氧菌利用豆粕提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得以大量繁殖（姜丹，2011），消耗氧氣造成厭氧環(huán)境，為乳酸菌的生長(zhǎng)提供有利條件；同時(shí)乳酸菌在發(fā)酵過(guò)程中，能夠產(chǎn)生一些酶類將發(fā)酵基質(zhì)中的葡萄糖或乳糖轉(zhuǎn)化成乳酸等有機(jī)酸，進(jìn)而降低飼料的pH（吳逸飛等，2016；李永凱等，2009）。

3.2 復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵豆粕對(duì)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)變化的影響

益生菌發(fā)酵飼料及原料， 能夠改善其營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)。益生菌在繁殖過(guò)程中能夠?qū)⑴囵B(yǎng)基中的非蛋白氮、無(wú)機(jī)氮轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高的菌體蛋白，Stale 等（2005）研究發(fā)現(xiàn)，使用乳酸菌發(fā)酵豆粕，粗蛋白質(zhì)含量提高8.71%，脲酶抑制劑含量降低80.64%。同時(shí)微生物發(fā)酵能夠產(chǎn)生一些酶類將大分子的蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)化成小分子肽，小分子的肽具有特殊的營(yíng)養(yǎng)性能，其能夠被動(dòng)物直接吸收，參與機(jī)體生理活動(dòng)， 部分小肽還能促進(jìn)幼小動(dòng)物腸道的提早成熟，刺激消化酶的分泌，提高機(jī)體免疫力（吳勝華等，2008）。Song 等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，釀酒酵母菌發(fā)酵豆粕總蛋白含量提高23.4%， 游離氨基酸提高21 倍。本試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵豆粕粗蛋白質(zhì)含量提高6.07%， 發(fā)酵后酸溶蛋白含量和總酸含量分別是對(duì)照的3.87 倍和5.23 倍。

3.3 復(fù)合益生菌固態(tài)發(fā)酵豆粕對(duì)大腸桿菌、霉菌和揮發(fā)性鹽基氮的影響

復(fù)合益生菌發(fā)酵豆粕由于大量乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖，pH 顯著降低， 從而抑制了大腸桿菌和霉菌等有害微生物的生長(zhǎng)。馮杰等（2007）研究表明，發(fā)酵豆粕較高的乳酸菌含量能夠抑制大腸桿菌的繁殖， 降低仔豬的腹瀉指數(shù)以及料重比，提高飼料消化吸收率，同時(shí)仔豬排泄物中氨氮減少，對(duì)環(huán)境起到一定改善作用；王龍昌等（2010）在肉雞上也有類似發(fā)現(xiàn)。揮發(fā)性鹽基氮（TNB-N） 是衡量動(dòng)物性蛋白質(zhì)飼料新鮮度的理化指標(biāo)，是由于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖和酶的作用，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生胺類以及氮等具有揮發(fā)性的堿性含氮物質(zhì)（彭?xiàng)钏嫉龋?016；劉雪云，2014）。發(fā)酵豆粕中揮發(fā)性鹽基氮通常要求≤100 mg/100 g。本試驗(yàn)結(jié)果表明， 復(fù)合益生菌組由于益生菌作用使得蛋白質(zhì)分解，揮發(fā)性鹽基氮含量升高，這與測(cè)定的粗蛋白質(zhì)含量升高結(jié)果一致。