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導(dǎo)   讀

現(xiàn)代畜牧生產(chǎn)中，抗生素被廣泛用作生長促進(jìn)劑，但因抗藥性、藥物殘留等問題，飼用抗生素在畜牧養(yǎng)殖中的限用和禁用已為大勢所趨，而抗生素替代品的研究成為動物營養(yǎng)學(xué)的研究熱點(diǎn)之一，該項(xiàng)研究也因此對維持畜禽健康和生態(tài)環(huán)境具有重要意義。乳酸菌對腸道黏膜表面的黏附能力，是拮抗腸道病原微生物定植及集群生長的先決條件，并且對免疫調(diào)節(jié)及促進(jìn)受損黏膜的修復(fù)具重要意義。乳酸菌和酵母菌通過代謝產(chǎn)物的互補(bǔ)和群體感應(yīng)作用，相互促進(jìn)生長，因此乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑在腸道等環(huán)境里比單獨(dú)添加乳酸菌或酵母菌生長更好，也能更充分地發(fā)揮益生作用。在飼糧或飲水中添加乳酸菌或酵母菌可顯著提高肉雞體重，降低料重比(feed to gain ratio，F(xiàn)/G)，增加絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度(V/C)值，增加腸道有益菌數(shù)量，降低有害菌數(shù)量，且乳酸菌或酵母菌組改善生長性能效果顯著優(yōu)于抗生素組。但目前關(guān)于乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑替代抗生素以及與抗生素聯(lián)合使用的研究還不充分。因此，本試驗(yàn)旨在研究乳酸菌和酵母菌的復(fù)合制劑替代抗生素以及聯(lián)合使用對愛拔益加(AA)肉仔雞生長性能、屠宰性能以及腸道健康的影響，為該微生態(tài)制劑在肉仔雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。 

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑：乳酸菌(BCRC16092)活菌數(shù)為2.5×109 CFU/g(實(shí)測2.3×106 CFU/g)，酵母菌(BCRC 20262)活菌數(shù)為1.3x109 CFU/g(實(shí)測1.3×106CFU/g)。維吉尼亞霉素：有效成份含量50％。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)隨機(jī)選取健康、體重相近[(40.3±5.0)g]的1日齡AA肉仔雞公雛400只，隨機(jī)分為4組，每組5個重復(fù)，每重復(fù)20只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加30 mg/kg維吉尼亞霉素(VM組)、15 mg/kg維吉尼亞霉素+1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑(VM+LS組)、1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑(LS組)的試驗(yàn)飼糧。采用4層立體網(wǎng)上籠養(yǎng)，試驗(yàn)分前期(1~21日齡)和后期(22~42日齡)，共42 d。基礎(chǔ)飼糧(組成及營養(yǎng)水平見表1)參照NRC(1994)和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)，結(jié)合《AA肉仔雞飼養(yǎng)手冊》配制粉料，配合飼料再經(jīng)冷壓制粒(制粒過程中最高溫度65℃左右)，制粒后迅速冷卻顆粒料，以減小制粒溫度對乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑的影響，最終以顆粒料形式進(jìn)行飼喂。

試驗(yàn)期問自由飲食、飲水，自然光照加人工補(bǔ)光，1~7日齡每天光照24 h，8 日齡后23 h。試驗(yàn)前3 d室溫33℃ ，此后每周降低2℃ ，直到24℃并維持。按照《AA肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊》操作，常規(guī)免疫、消毒，試驗(yàn)雞舍良好通風(fēng)。試驗(yàn)過程中，每日24 h記錄雞舍溫度和濕度，清掃衛(wèi)生，記錄死淘雞數(shù)。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長性能

每天觀察雞的生長、發(fā)病及死亡情況，以重復(fù)為單位，記錄死淘數(shù)和耗料量；分別于1、21和42日齡09：00之前，以重復(fù)為單位空腹稱重，統(tǒng)計(jì)各重復(fù)試驗(yàn)雞1~21、22~42日齡耗料量，計(jì)算21和42日齡的平均體重，1~21、22~42和1~42日齡的平均日增重(average daily gain，ADG)、平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、F/G和死亡率。

1.3.2 屠宰性能

分別于肉仔雞的21和42日齡，每重復(fù)選取2只體重接近該重復(fù)平均值的肉仔雞，頸靜脈放血屠宰，分離胸肌、腿肌和腹脂，稱重并記錄，按照全國家禽育種委員會的家禽生產(chǎn)性能計(jì)算方法，計(jì)算全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。公式如下：

全凈膛率(％)=100x全凈膛重/宰前體重；

胸肌率(％)=100x胸肌重/全凈膛重；

腿肌率(％)=100x腿肌重/全凈膛重；

腹脂率(％)=100x腹脂重/(全凈膛重+腹脂重)。

其中，宰前體重指在屠宰前停飼12 h后的重量。

1.3.3 腸道黏膜形態(tài)

分別于21和42日齡，每重復(fù)隨機(jī)選取1只體重接近該重復(fù)平均值的肉仔雞，屠宰，剝離出十二指腸、空腸和回腸，各自截取中段約1 cm 的腸道組織，用預(yù)冷的生理鹽水緩緩沖洗，浸入pH為7.4的福爾馬林固定液，4℃冰箱保存。將固定好的腸道組織進(jìn)行石蠟切片：組織脫水→透明→浸蠟→包埋→不連續(xù)切(厚度為6~8 μm)→蘇木精→伊紅(HE)染色處理→封片待測黏膜形態(tài)。從每20張中取1張切片，每個腸道組織取5張切片，于光學(xué)顯微鏡下觀察形態(tài)。每個切片隨機(jī)抽取5個非連續(xù)性視野(保證絨毛完整且走向平直)，每個視野統(tǒng)計(jì)3組數(shù)據(jù)，測定絨毛高度、隱窩深度，并計(jì)算V/C值。每個指標(biāo)選取9個值計(jì)算。切片制備及相關(guān)指標(biāo)的測定由北京嘉藍(lán)海生物科技有限公司操作。

1.3.4 盲腸菌群數(shù)量

分別于21和42日齡，從每個重復(fù)中隨機(jī)抽取1只空腹(自由飲水)12 h，且接近平均體重的肉雞稱重，采用心臟注入空氣法處死雞，截取盲腸腸段，液氮保存至分析。采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測盲腸食糜內(nèi)菌群。從液氮中取出樣品，在無菌操作室內(nèi)用酒精棉球消毒各結(jié)扎口，取盲腸食糜1 g加入盛9 mL 0.9％無菌生理鹽水的試管中搖勻，小型振動器充分混勻；取0.5 mL該懸浮液加入到盛4.5 mL無菌0.9％生理鹽水的試管中，混勻，重復(fù)同樣操作，直至稀釋倍數(shù)為10-4~10-6的3個梯度，分別取0.1 mL稀釋液加入準(zhǔn)備好的平板培養(yǎng)皿中，用滅菌的曲玻棒將菌液小心涂勻至整個平板培養(yǎng)皿。每個稀釋梯度做3個重復(fù)。大腸桿菌接種于伊紅美藍(lán)(EMB)平板培養(yǎng)基上，37℃有氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h；乳酸菌接種于MRS平板培養(yǎng)基上，37℃的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h。將培養(yǎng)后的平板培養(yǎng)皿進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以菌落數(shù)量在30~300個之間的平皿計(jì)數(shù)。菌群數(shù)量以每克盲腸食糜所含細(xì)菌群落總數(shù)的對數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。前期和后期生長性能采用一般線性模型(general linear model)的Repeated Measures過程分析，若球形檢驗(yàn)結(jié)果P>0.05則進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若P<0.135則用Multivariate過程對4個處理進(jìn)行分析。死亡率采用卡方檢驗(yàn)。其余指標(biāo)數(shù)據(jù)采用one-way ANOVA對4個處理進(jìn)行分析，當(dāng)有顯著性差異時再采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 

2  結(jié)果與分析

2.1 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞生長性能的影響

由表2可知，1~21日齡，與對照組相比，VM、VM+LS和LS組的ADG、ADFI、F/G、死亡率以及21日齡體重均無顯著變化(P>0.05)。22~42日齡，與對照組相比，VM+LS和LS組的ADG顯著提高(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著降低(P

2.2 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑肉仔雞屠宰性能的影響

由表3可知，飼糧中添加乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑及其與維吉尼亞霉素聯(lián)用對21日齡肉仔雞的屠宰性能無顯著影響(P>0.05)；42 日齡，VM+LS組肉仔雞全凈膛率顯著高于對照組(P

2.3 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞腸道黏膜形態(tài)的影響

由表4可知，與對照組相比，21日齡 ，LS組的十二指腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P<0.05)；LS組的空腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P<0.05)，隱窩深度顯著降低(P<0.05)；VM+LS和LS組回腸的V/C值顯著提高(P<0.05)。與對照組相比，42日齡，VM+LS和LS組的十二指腸和空腸絨毛高度及V/C值顯著提高(P

2.4 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞盲腸菌群數(shù)量的影響

由表5可知，21日齡，與對照組相比，VM、VM+LS和LS組盲腸大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量以及大腸桿菌/乳酸桿菌值均無顯著差異(P>0.05)。42日齡，與對照組相比，VM+LS和LS組的盲腸大腸桿菌數(shù)量和大腸桿菌/乳酸桿菌值顯著降低(P

3 討 論

3.1 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞生長性能的影響

畜禽的ADG和F/G是反映益生菌制劑有效性和經(jīng)濟(jì)性的重要指標(biāo)。王利紅研究表明，飼糧中添加109 CFU/kg的乳酸菌可顯著提高肉仔雞42日齡體重，顯著降低1~42日齡的F/G，而在肉仔雞飲水中添加乳酸菌，肉仔雞的ADG顯著提高，F(xiàn)/G顯著降低；Gil De Los Santos等研究表明，飼糧中添加1x107 CFU/g活酵母菌顯著提高肉仔雞BW，說明無論是乳酸菌還是酵母菌都可顯著改善肉仔雞生長性能。這些研究與本試驗(yàn)結(jié)果相一致，即在肉仔雞飼糧中添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑可顯著提高生長性能，且本試驗(yàn)中乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑組的22~42日齡ADG顯著高于維吉尼亞霉素組、F/G顯著低于維吉尼亞霉素組。

維吉尼亞霉素能夠不可逆地抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡，通常用于預(yù)防和治療革蘭氏陽性菌的感染。目前，乳酸菌或酵母菌與抗生素聯(lián)合使用的研究較少，本試驗(yàn)中用乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑替代部分維吉尼亞霉素，結(jié)果表明15 mg/kg維吉尼亞霉素與1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌聯(lián)用組的1~42日齡ADG和42日齡體重均顯著高于30 mg/kg維吉尼亞霉素組。說明1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑與15 mg/kg維吉尼亞霉素聯(lián)合使用促生長作用效果更好，二者之間可能存在協(xié)同作用，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.2 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞屠宰性能的影響

乳酸菌可顯著提高肉仔雞的全凈膛率和胸肌率，李菊等研究表明，與對照組和100 mg/kg金霉素組相比，5 000 mg/kg乳酸菌組的胸肌率分別顯著提高了7.15％和4.38％。微生態(tài)制劑與抗生素聯(lián)用對屠宰性能影響的研究較少，本試驗(yàn)中，乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑組及其與維吉尼亞霉素聯(lián)用組與對照組相比，胸肌率分別顯著提高了4.33％和4.57％，說明乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑及其與維吉尼亞霉素聯(lián)用均能顯著提高42日齡肉仔雞的屠宰性能。當(dāng)肉仔雞飼糧中分別添加5~20 mg/kg維吉尼亞霉素對屠宰性能無顯著影響，而本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧添加30 mg/kg維吉尼亞霉素可顯著提高胸肌率；而維吉尼亞霉素劑量減少至15 mg/kg，同時添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑時，全凈膛率和胸肌率都顯著提高，可能是維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑聯(lián)合使用時存在協(xié)同作用，但還需后續(xù)試驗(yàn)驗(yàn)證。

3.3 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑對肉仔雞腸道健康的影響

腸道是肉仔雞主要的消化吸收器官，當(dāng)絨毛高度增加時，小腸的消化吸收功能增強(qiáng)；隱窩深度變淺時，機(jī)體消化道發(fā)育更成熟。V/C值升高，表明小腸消化吸收功能增強(qiáng)，腸黏膜結(jié)構(gòu)改善。許多研究表明，肉仔雞飼糧中添加乳酸菌，腸道絨毛高度及V/C值顯著提高，隱窩深度顯著降低 。本試驗(yàn)結(jié)果表明，21和42 日齡時，飼糧添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑使得空腸絨毛高度和V/C值顯著升高，與前人研究結(jié)果相近。此外，本試驗(yàn)中，與添加30 mg/kg維吉尼亞霉素相比，添加1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑可顯著改善腸道黏膜形態(tài)，說明該益生菌復(fù)合制劑更利于維持腸道形態(tài)健康。維吉尼亞霉素主要在腸道中起到殺菌作用，減少有害菌對腸黏膜的損害，乳酸菌可通過刺激腸道黏液蛋白2的表達(dá)來保護(hù)肉仔雞小腸黏膜，二者協(xié)同作用改善腸道健康。徐基利等 研究表明，在肉仔雞飼糧中分別添加乳酸菌和黃霉素，乳酸菌組的腸道絨毛高度顯著增加，隱窩深度顯著降低，抗生素組十二指腸絨毛高度和隱窩深度沒有顯著變化。本試驗(yàn)中，與對照組相比，維吉尼亞霉素組十二指腸、回腸和空腸的絨毛高度和隱窩深度均無顯著變化，而維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑聯(lián)用組的42日齡十二指腸和空腸的絨毛高度和V/C值顯著升高，說明維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑聯(lián)合使用可改善腸道黏膜形態(tài)，從而提高腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，提高生長性能。

動物腸道內(nèi)主要依靠有益菌(乳酸桿菌、雙歧桿菌等)維持微生物區(qū)系平衡。有益菌通過產(chǎn)生細(xì)菌素、抗生素和其代謝產(chǎn)物，以及爭奪空問、營養(yǎng)，從而阻止有害菌群過度繁殖，保持微生物區(qū)系的穩(wěn)定性，從而提高生長性能。研究證實(shí)飼糧中添加乳酸菌能夠顯著增加盲腸乳酸桿菌數(shù)量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑組的盲腸大腸桿菌數(shù)量和大腸桿菌/乳酸桿菌值顯著降低，與崔一酷等 在肉仔雞飼糧中添加2 000 mg/kg植物乳酸菌的研究結(jié)果相一致，而本試驗(yàn)中維吉尼亞霉素組的盲腸大腸桿菌數(shù)量沒有顯著變化，可能是因?yàn)榫S吉尼亞霉素主要是改善前段腸道菌群穩(wěn)定性。

維吉尼亞霉素通過抑制細(xì)菌核糖體的合成殺死部分革蘭氏陽性細(xì)菌，乳酸菌和酵母菌通過拮抗作用、干擾作用和屏障作用等減少腸道有害菌的數(shù)量，二者協(xié)同增加腸道有益菌數(shù)量和種類，減少有害菌的數(shù)量，改善腸道健康。Dumonceaux等 研究表明，在肉仔雞飼糧中添加20 mg/kg維吉尼亞霉素，可顯著增加小腸前段的菌群穩(wěn)定性。本試驗(yàn)中乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑與維吉尼亞霉素聯(lián)合使用能顯著降低盲腸大腸桿菌數(shù)量和大腸桿菌/乳酸桿菌值，說明1 000 mg/kg乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑與15 mg/kg維吉尼亞霉素通過在腸道內(nèi)協(xié)同提高腸道菌群的穩(wěn)定性，提高腸道吸收能力，從而改善肉仔雞的生長性能。

4  結(jié)  論

① 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑及其與維吉尼亞霉素聯(lián)用均能改善肉仔雞生長性能和飼料效率，且維吉尼亞霉素與乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑聯(lián)用效果更優(yōu)。

② 乳酸菌和酵母菌復(fù)合制劑及其與維吉尼亞霉素聯(lián)用均能改善腸道黏膜形態(tài)，降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，改善腸道微生物區(qū)系，促進(jìn)生長。

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